Un organisme transgènic és aquell en el que s'ha introduït un fragment de DNA forani deliberadament i aquesta alteració és transmesa al seus descendents. Fa més de vint anys es va aconseguir crear ratolins transgènics amb la tècnica d'injecció de DNA en un zigot cultivat in vitro (tècnica anomenada transgènesi). Maria Ballester ha llegit la seva tesi doctoral sobre la utilització d'aquesta tècnica en la producció de l'Hormona Estimulant del Fol·licle (FSH), que estimula el creixement i maduració de diverses estructures reproductives – com els òvuls – en la llet d'animals transgènics.

Tesis: “La ß-lactoglobulina y su aplicación en transgénesis”, llegida el 18 d'abril de 2005 per Maria Ballester Devís, i dirigida per Armand Sánchez Bonastre i Josep Mª Folch Albareda.

Desde que en 1980 aparecieran los primeros ratones transgénicos generados mediante la técnica de microinyección a pronúcleo, el área de la transgénesis ha evolucionado de forma notable. Gracias a este progreso, se han propuesto aplicaciones importantes para los animales domésticos transgénicos tanto en los campos de la agricultura como de la biomedicina. Una de estas aplicaciones es la síntesis de proteínas recombinantes de elevado interés farmacológico, siendo el objetivo final de nuestro trabajo la obtención de la Hormona Estimulante del Folículo (FSH) humana en la leche de animales transgénicos.

En nuestro grupo, previamente a este trabajo, se han llevado a cabo distintos proyectos con el fin de estudiar las regiones reguladoras del gen de la b -lactoglobulina ( b LG) caprina y obtener así un cassette de expresión que pueda dirigir la expresión del transgén de forma específica y eficaz a la glándula mamaria de los animales transgénicos. Estos trabajos nos permiten disponer actualmente de un cassette de expresión, que ha sido utilizado para dirigir la expresión de las dos subunidades ( a y b ) de la FSH humana a la glándula mamaria de ratones transgénicos, obteniéndose 4 líneas transgénicas que son capaces de expresar los dos transgenes en su glándula mamaria. Las construcciones han sido testadas previamente en el ratón ya que presenta un menor coste de mantenimiento y su ciclo reproductivo e intervalo generacional son más cortos con respecto a los animales de producción.


Figura 1. Ratones de la línea tg56, el ratón de la izquierda es el animal homocigoto, a la derecha está su hermano normal heterocigoto.

Por otra parte, en la obtención de ratones transgénicos para el transgén de la b LG caprina, con el fin de testar las regiones reguladoras del gen, se observó un fenotipo conspicuo en los ratones homocigotos de la línea tg56 (figura 1); en el presente trabajo se ha caracterizado el lugar de integración de este transgén, el cual provocó una mutación por inserción en el gen de la Fosfolipasa C- b 1 del ratón.

Asimismo, se ha desarrollado un nuevo protocolo basado en la PCR cuantitativa a tiempo real para determinar el número de copias integradas del transgén en las distintas líneas transgénicas. Este método puede ser utilizado en todas aquellas líneas transgénicas que contengan cassettes de expresión pertenecientes a genes de especies rumiantes.

Por último se han identificado y caracterizado un total de 15 polimorfismos en el gen de la b LG caprina, 9 de los cuales se encuentran localizados en la región promotora proximal, con el fin de encontrar mutaciones en las regiones reguladoras que puedan ser importantes en la expresión del gen.

Maria Ballester Devis
Departament Ciència Animal i dels Aliments
Universitat Autònoma de Barcelona
Adreça electrònica: maria.ballester@uab.es